一、從無菌室設置上規(guī)范
微生物無菌室則應根據(jù)日常檢驗的微生物項目需要,按照國標《GB 19489-2008實驗室生物安全通用要求》的生物安全等級以及《GB 4789.1食品安全國家標準食品微生物學檢驗總則》要求設置,病原微生物分離鑒定工作應在二級以上生物安全實驗室( Biosafetylevel2,BSL-2 )進行。一般食品生產(chǎn)經(jīng)營企業(yè)日常微生物監(jiān)控的無菌室按照(Biosafetylevel1,BSL-1 )安全等級設置即可。無菌室內(nèi)環(huán)境的溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等應符合工作要求:能控制溫度在15℃~25℃、 相對濕度≤80%,因此需要安裝凈化空調(diào),室內(nèi)裝備的換氣設備采用單向送風系統(tǒng)并必須有空氣過濾裝置,送風裝置有初、中、高級過濾器,送風口末端設置高效過濾裝置,上送下排(送風口安裝在無菌室頂部天花、排風口設置在無菌室四周墻腳),確保送出的空氣潔凈,以致使無菌操作核心室潔凈度達到100000級或以上,超凈臺潔凈度達到100級。并保證無菌室保持正壓。檢驗操作必須在無菌室內(nèi)的超凈臺上進行。
無菌室一般是在微生物實驗室內(nèi)專辟一個小房間。面積不宜過大,約4~5平 方米即可,高2.5米左右。應分別設置設1~2個緩沖、風淋間、再進入無菌室,無菌室和緩沖間都必須密封防止嚙齒動物進入無菌室,緩沖間的門和無菌室的門不要朝向同一方向,以免氣流帶進雜菌。
安裝兩個傳遞窗(一個傳入窗、一個傳出窗)使傳入傳出物品能夠分開傳遞,在靠近進風位處的傳遞窗作為傳入物品使用,靠近出風口的傳遞窗作為傳出物品使用。并在無菌室的-側(cè)墻面設置一個觀察窗, 以便隨時觀察無菌室內(nèi)的情況及新人操作學習。工作臺的臺面應該處于水平狀態(tài)。
無菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整,不易藏污納垢,便于清洗。無菌室可以用50mm不銹彩鋼夾芯彩板材和玻璃建造,所有交角位為圓弧形密封設計,地面采用3mm環(huán)氧樹脂或者PVC膠板,不留地漏。
無菌室、超凈臺、傳遞窗、緩沖間和風淋間都應裝有紫外線燈,無菌室內(nèi)的紫外燈安裝高度在1.5m~2m之間,安裝的數(shù)量一般為平均1.5W/m3(照射強度≥70MW/cm2),為避免紫外燈對操作人員造成傷害,紫外燈控制開關(guān)應當設置在無菌室外,或者安裝定時自動開關(guān)裝置。工作人員進入無菌室應在-級緩沖間穿滅過菌的服裝,戴帽子,再進入風淋間使用無菌風進一步除掉身.上的塵埃及菌。
二、從操作人員的使用無菌室的標準進行規(guī)范化
可將進入無菌室的操作編寫成標準操作書,統(tǒng)一檢驗人員的操作,以下向大家介紹一下進入無菌室的一般操作步驟。
(1)將無菌室門窗密閉,打開無菌室、緩沖間及傳遞箱紫外燈,滅菌至少30min后,關(guān)閉紫外燈。
( 2 )臭氧對人體有傷害,紫外燈關(guān)閉30min后,操作人員方可進入無菌室及緩沖間。
(3)將需要傳入無菌室內(nèi)的物品用75%酒精棉充分擦拭或用75%酒精噴霧后放入傳遞箱(傳入窗),關(guān)閉傳遞箱門。
(4)操作人員進入無菌室,應嚴格遵守進入無菌作業(yè)區(qū)的要求,在緩沖間內(nèi)穿好醫(yī)用手套、用75%酒精噴灑雙手,穿好無菌服、戴無菌口罩、無菌帽子( 將頭發(fā)全部用帽子裹好)、換無菌室專用鞋。
(5)操作員更衣完畢,進入風淋間啟動風淋機吹無菌風30秒,邊吹邊轉(zhuǎn)動身體。
(6)進入無菌室內(nèi),將無菌室放置樣品的臺(或者臺車,如有配備)用75%酒精噴霧,打開傳遞箱門將需要傳入無菌室內(nèi)的物品從傳遞箱取出并放在臺上(或臺車上),備用。
( 7 )操作過程所有需要傳入的物品用75%酒精棉充分擦拭或用75%酒精噴霧后使用傳入窗傳入,傳出物品使用傳出窗傳出。
注意:在無菌室中工作時,要求盡量避免走動、物品傳遞和少說話,盡量減少樣品的暴露時間。( 如操作人員因故離開無菌室,當再次進入無菌室時,必須用75%酒精噴灑雙手,穿好無菌服、戴無菌口罩、無菌帽子(將頭發(fā)全部用帽子裹好)、換無菌室專用鞋。)檢驗過程有樣品灑落要及時用酒精棉擦凈。
三、無菌室維護保養(yǎng)方面
(1)每天使用無菌室完畢要進行結(jié)束清理,對無菌室傳遞箱,超凈臺及其頂部、四周,無菌室、緩沖間內(nèi)窗臺、門窗、地面,儀器表面及所有無菌室、緩沖間內(nèi)其它物品用消毒水( 1:50 84消毒液 )或75%酒精進行清潔。將無菌室密閉后,打開無菌室、緩沖間及傳遞箱紫外燈,滅菌至少30min后,關(guān)閉紫外燈。
(2)建立無菌室空氣微生物檢驗計劃,并按要求定期做無菌室室內(nèi)空氣以及對無菌室地面使用擦拭棒進行擦拭實驗,檢測細菌總數(shù)及真菌( PCA和PDA或孟加拉紅培養(yǎng)基),一般一個月檢測一次,出現(xiàn)異常時增加檢驗頻
(3)紫外燈滅菌時間應參考無菌室室內(nèi)空氣微生物檢測情況,也可以根據(jù)紫外燈說明書的有效時間確其的使用時間。( 紫外線燈管有高硼玻璃和石英玻璃之分,由于高硼玻璃的UV254nm紫外線透過率只有50%左右,所以其紫外線燈紫外線輻照強度小,壽命短,一般情況標準的紫外燈能放射足夠的紫外線能量1000小時。石英是紫外線透過率最高的材料,普通石英可以透過UV254的80%以上,所以其紫外線強度大,壽命長,殺菌效果好,石英玻璃紫外線燈壽命-般大于6000小時。) 我們先將所有紫外燈編號好,然后編制無菌室紫外燈使用記錄表,采用累加時間或者累減時間法以提醒到期更換紫外燈。例如采用遞減法記錄,1號紫外燈初始時間是1000h每天操作前后均開啟0.5h,即每天使用1h,也就是每天減1h,直至為0,就要更換紫外燈。每天觀察檢查紫外燈使用情況,假如紫外燈還沒有使用到時間就燒掉或者發(fā)黑就要提前更換,更換后讀數(shù)重新以1000h開始記錄,周而復始。
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